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微生物木質(zhì)素(Lignin)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)
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  微生物木質(zhì)素(Lignin)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)

  BS-5184微生物木質(zhì)素(Lignin)ELISA試劑盒

  1. 產(chǎn)品概述

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專(zhuān)用于定量檢測(cè)微生物發(fā)酵液、細(xì)胞裂解液等樣本中的木質(zhì)素含量。木質(zhì)素是微生物代謝或降解植物細(xì)胞壁過(guò)程中產(chǎn)生的芳香族聚合物,其含量變化可反映微生物對(duì)木質(zhì)纖維素的利用效率?。

  2. 檢測(cè)原理

  固相抗體包被微孔板捕獲樣本中的木質(zhì)素,再加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。洗滌后加入TMB底物顯色,450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,吸光度值與木質(zhì)素濃度呈正相關(guān)?。

  3. 試劑盒組成

  組分 96孔配置 48孔配置 保存條件

  微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 2-8℃密封干燥

  標(biāo)準(zhǔn)品(木質(zhì)素) 0.5mL×6管 0.5mL×6管 -20℃避光

  樣本稀釋液 6mL 3mL 2-8℃

  酶標(biāo)抗體-HRP 10mL 5mL 2-8℃避光

  20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 室溫

  TMB顯色液 9mL 4.5mL 2-8℃避光

  終止液 9mL 4.5mL 室溫

  封板膜 2張 2張 室溫

  4. 樣本處理

  4.1 微生物發(fā)酵液

  8000×g離心10分鐘去除菌體

  取上清液立即檢測(cè)或-80℃凍存(避免反復(fù)凍融)

  4.2 細(xì)胞裂解液

  超聲破碎后12000×g離心15分鐘

  取上清液用PBS稀釋10倍后檢測(cè)

  4.3 注意事項(xiàng)

  樣本渾濁需0.22μm濾膜過(guò)濾

  避免使用含疊氮鈉的樣本(抑制HRP活性)

  5. 實(shí)驗(yàn)步驟

  5.1 試劑準(zhǔn)備

  洗滌緩沖液:蒸餾水稀釋20倍至1×工作液

  標(biāo)準(zhǔn)品梯度:按說(shuō)明書(shū)稀釋至0-60μg/mL

  5.2 加樣

  標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各50μL加入對(duì)應(yīng)微孔

  37℃孵育30分鐘

  5.3 洗滌

  每孔加300μL洗滌液,靜置1分鐘后拍干

  重復(fù)5次

  5.4 顯色

  每孔加酶標(biāo)抗體100μL,37℃孵育30分鐘

  洗滌后加TMB顯色液90μL,避光15分鐘

  加終止液50μL終止反應(yīng)

  5.5 測(cè)定

  450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值(參考波長(zhǎng)630nm)

  6. 結(jié)果計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。樣本濃度通過(guò)曲線(xiàn)方程計(jì)算,超出范圍需稀釋后復(fù)測(cè)。

  7. 性能指標(biāo)

  參數(shù) 指標(biāo)

  靈敏度 ≤0.5μg/mL

  檢測(cè)范圍 1-60μg/mL

  精密度 批內(nèi)CV<8%,批間CV<12%

  回收率 85%-115%

  8. 注意事項(xiàng)

  試劑盒使用前需室溫平衡30分鐘

  不同批號(hào)試劑不可混用

  終止液含強(qiáng)酸,操作時(shí)佩戴防護(hù)裝備

  顯色液避免接觸金屬離子

  微量移液器需校準(zhǔn),避免交叉污染

  9. 有效期

  6個(gè)月(2-8℃保存)

  10. 聲明

  本產(chǎn)品僅供科研使用。

  注:以上僅供參考,本試劑僅供科研使用,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。

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